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      北京伯樂(lè)生命科學(xué)發(fā)展有限公司上海辦事處 (上海天崛電子科技有限公司)

      酶標(biāo)儀.超低溫冰箱.移液器.洗板機(jī).離心機(jī).二氧化碳培養(yǎng)箱.凝膠成像系統(tǒng)

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      染色體CBG標(biāo)本制備

      點(diǎn)擊次數(shù):875 發(fā)布時(shí)間:2010-7-5

      一、原理
          異染色質(zhì)在整個(gè)分裂間期及分裂期都是濃縮的,因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近,或在染色體臂上呈現(xiàn)“團(tuán)塊”,這些染色質(zhì)主要由
      C顯帶技術(shù)呈現(xiàn),故稱(chēng)為C帶。CBG即C帶、Ba(OH)2、Giemsa的簡(jiǎn)寫(xiě)。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA,但在C帶區(qū)有很強(qiáng)抗性,仍保留大部分DNA,Giemsa染色后可見(jiàn)效果良好的C帶。抽取DNA的過(guò)程由三個(gè)連續(xù)操作形成。首先,酸處理可使DNA脫嘌呤,但未使DNA骨架斷裂;其次熱堿處理可使DNA變性,促進(jìn)繼發(fā)的DNA溶解;zui后,熱鹽溶液使DNA骨架斷開(kāi)并使碎片溶解進(jìn)入溶液中。因此,zui終以Giemsa染料顯示出DNA的不同分布。在優(yōu)良的C帶標(biāo)本中,常染色質(zhì)只呈現(xiàn)中期染色體的一般外貌,結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū)著色很深。
         
      C帶在檢查1、9、16特別是Y染色體的異質(zhì)區(qū)時(shí)尤為重要。

      二、用品和試劑
          0.2N HCl,5% Ba(OH)2,2×SSC,Giemsa染色液。恒溫水浴箱,染色缸。其余同外周血染色體制備。
      三、操作步驟
          (一)方法一
          l.酸處理:常規(guī)制作的染色體標(biāo)本(未染色)置0.2N HCl(室溫)處理15—30分鐘。水洗。
          2.堿處理:浸入已預(yù)溫至56℃的5% Ba(OH)2水溶液10分鐘。水洗。
          3.熱鹽處理:置2×SSC溶液(67℃)處理60—90分鐘。水洗。
          4.染色:l∶10 Giemsa染色液染色10—5分鐘。水洗。氣干。
          5.鏡檢。
         (二)方法二
          l.酸處理:常規(guī)制作的染色體標(biāo)本(未染色)置0.2N HCl(室溫)處理60分鐘。水洗。
          2.堿處理:浸入1% Ba(OH)2水溶液(50℃)中15—20秒。水洗。
          3.熱鹽處理:置2×SSC溶液(60℃)90分鐘。水洗三次。
          4.染色:l∶10 Giemsa染色液染色10分鐘。水洗。氣干。
          5.鏡檢。

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